胃蛋白酶原（PG）的定量檢測(cè)方法
胃蛋白酶原（PG）是一種胃蛋白酶非活性前體，包含PGⅠ和PGⅡ兩個(gè)亞群。人體血清胃蛋白酶原的含量變化可反應(yīng)胃粘膜的功能情況。血清PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ（PGR）值下降是臨床早期胃癌篩選的有效指標(biāo)。除了PG水平，臨床上還需結(jié)合患者體內(nèi)G17水平、幽門螺桿菌（HP）水平以及胃鏡活檢等其他檢測(cè)結(jié)果才能做出準(zhǔn)確的診斷。胃蛋白酶原的臨床定量檢測(cè)方法較多，目前主要有流式熒光發(fā)光免疫微球、時(shí)間分辨熒光免疫、乳膠增強(qiáng)免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫分析、酶聯(lián)免疫吸附以及放射免疫分析等方法。
原理簡(jiǎn)介
1. 流式熒光發(fā)光免疫微球分析技術(shù)（Flow fluorenscence immunmicrobeads assay, FFIA）
該技術(shù)以熒光編碼微球和雙激光流式檢測(cè)技術(shù)為核心，通過熒光標(biāo)記PG抗體溶液，加入檢測(cè)樣本，再加入交聯(lián)特異性捕獲抗體的熒光編碼微球懸液，形成夾心復(fù)合物（交聯(lián)捕獲抗體的編碼微球-PG抗原-熒光標(biāo)記PG抗體復(fù)合物）。復(fù)合物被鞘液隔開逐一通過激光檢測(cè)，通過不同的激光通道分別識(shí)別出編碼的微球和熒光標(biāo)記PG抗體。編碼微球上的標(biāo)記抗體熒光值與樣本中的PG抗原呈正比，再通過相應(yīng)的校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng)的樣本PG含量。
2. 時(shí)間分辨熒光免疫分析（Time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）
在熒光分析的基礎(chǔ)上發(fā)展而來。利用鑭系元素?zé)晒鈮勖L(zhǎng)的特點(diǎn)，根據(jù)波長(zhǎng)和時(shí)間進(jìn)行信號(hào)分辨，有效排除非特異性熒光。采用鑭系元素標(biāo)記胃蛋白酶原抗原；與檢測(cè)樣本發(fā)生免疫反應(yīng)，最后檢測(cè)熒光強(qiáng)度來判定樣品中抗原的水平。
3. 乳膠增強(qiáng)免疫比濁（Particle enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA）
由免疫比濁的方法發(fā)展而來，分為散射比濁和透射比濁兩種檢測(cè)法。其原理相似，都是將單克隆PG抗體交聯(lián)到膠乳顆粒表面；加入檢測(cè)樣本，發(fā)生免疫反應(yīng)，生成抗原-抗體-膠乳顆粒復(fù)合物；反應(yīng)液的散光性或透光性能改變，其濁度變化程度與樣本中的胃蛋白酶原抗原濃度呈正相關(guān)。
4. 化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay, CLIA）
此方法原理是用發(fā)光物質(zhì)或酶標(biāo)記PG抗體，與樣本中的胃蛋白酶原抗原反生免疫反應(yīng)后，加入氧化劑或者酶底物而發(fā)光，通過檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線判定樣本中PG抗原濃度。其標(biāo)記物主要有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、酶標(biāo)記兩類；常用標(biāo)記物分別為吖啶酯類化合物（AE）和辣根過氧化物酶(HRP)。
5. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）
常用的反應(yīng)方式有雙抗夾心、競(jìng)爭(zhēng)、間接、直接ELISA。其原理用酶標(biāo)記的抗體或者抗原指示免疫反應(yīng)，先將已知的抗原或抗體包被在固相載體表面，使免疫反應(yīng)在固定相上進(jìn)行。通過酶底物顯色反應(yīng)判定是否存在免疫反應(yīng)，根據(jù)顏色深淺進(jìn)行半定量，目前常用標(biāo)記物為HRP。
6. 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA）
主要原理是競(jìng)爭(zhēng)性抑制，利用放射性核素標(biāo)記提純的PG抗原，待測(cè)樣本中的PG抗原與標(biāo)記PG抗原共同與定量的PG抗體結(jié)合。反應(yīng)平衡后，通過測(cè)定放射性強(qiáng)度，求得未標(biāo)記的樣本PG抗原含量。
檢測(cè)方法比較
如表1所示，放射免疫分析由于其示蹤物質(zhì)具有放射性，所以應(yīng)用受限，普適性差。ELISA成本低，可進(jìn)行定性和半定量，適用于基層醫(yī)院。近年來乳膠增強(qiáng)免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫分析應(yīng)用廣泛，這兩種方法成本相對(duì)較低，靈敏度高于ELISA，適用于大、中型醫(yī)院。流式熒光發(fā)光免疫微球和時(shí)間分辨熒光免疫分析靈敏度高，但成本高，檢測(cè)需要配備昂貴的儀器，適用于有條件的醫(yī)院。
表1 檢測(cè)方法比較
| 檢測(cè)方法 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
|---|---|---|
| FFIA | 靈敏度較高，可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，檢測(cè)效率高，可進(jìn)行高通量檢測(cè)。 | 顯色本底高，定量分析范圍受限。 |
| PCT | 早期嚴(yán)重全身性細(xì)菌感染。 | 局部感染和慢性感染。 |
| TRFIA | 示蹤物穩(wěn)定，靈敏度較高，適用于超微量分析，定量分析量程寬，可排除非特異性熒光。 | 成本高，需要昂貴的檢測(cè)儀器；超微量分析時(shí)易受激發(fā)光的雜散光影響。 |
| PETIA | 穩(wěn)定性好，成本相對(duì)低，普通生化分析儀即可檢測(cè)。 | 靈敏度較低。 |
| CLIA | 抗干擾能力強(qiáng)，成本相對(duì)較低。 | 檢測(cè)速度慢。 |
| ELISA | 成本低，適用于定性檢測(cè)。 | 適用于半定量。 |
| RIA | 靈敏度高，適于微量分析。 | 具有放射性，會(huì)對(duì)人體或環(huán)境造成污染；且不穩(wěn)定，效期短不易保存，重復(fù)性差，不能廣泛應(yīng)用。 |
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